一、細胞特性

1. 細胞名稱：L Wnt-3A細胞（小鼠皮下結(jié)締組織細胞）
2. 形態(tài)：成纖維細胞樣，貼壁生長
3. 含量：>1x10⁶ 個/瓶
4. 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5. 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

二、細胞接收后的處理：
1、貼壁細胞

1. 收到T25方瓶細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們（凍存管細胞收到后直接37℃水浴復(fù)蘇或直接放置于液氮中長期儲存）。
2. 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3. 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，換用新鮮的*培養(yǎng)基。
4. 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5. 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

2、懸浮細胞

1. 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2. 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將15ml離心管置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3. 1200rpm離心5min，棄去15ml離心管中的培養(yǎng)基，細胞沉淀用新鮮的*培養(yǎng)基重懸并培養(yǎng)。
4. 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5. 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

                      
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一、L Wnt-3A細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1. 準備H-DMEM培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二、細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

   對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1200RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X10⁶個細胞凍存。

注意事項：
1. 收到凍存管細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
3. 細胞用途：僅供科研使用。

發(fā)貨方式：
復(fù)蘇后發(fā)貨：我們復(fù)蘇細胞后發(fā)貨，貨期一周左右，免運費。（氣溫較好建議復(fù)蘇后發(fā)貨）
凍存發(fā)貨(干冰運輸）：需額外增加干冰運費，選擇干冰運輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細胞，為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管。（氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨）
細胞發(fā)貨采取專業(yè)的運輸包裝，并選擇快捷的運輸方式（順豐速運或其他空運快遞）
本公司細胞引種來源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大細胞庫、上海生化細胞所、中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會等。

細胞培養(yǎng)常用試劑使用問答
1.谷氨酰胺使用方法是什么？
答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中單獨配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培養(yǎng)液中。
2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定？
答：碳酸氫鈉白色粉末，或不透明單斜晶系細微結(jié)晶。比重2.159。無臭、味咸，可溶于水，微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解，在65℃以上迅速分解，在270℃時*失去二氧化碳，在干燥空氣中無變化，在潮濕空氣中緩慢分解。