小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。
細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。
實驗步驟：
?、?入無菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消毒雙手；
② 倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預(yù)熱；
③ 超凈臺臺面應(yīng)整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔；
?、?打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右，關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機清潔空氣除去臭氧；
⑤ 點燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管，安上橡皮頭，過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)；
⑥ 將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上；
?、?倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基，洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。
小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)步驟：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。
更新時間：2020-07-20
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